1、將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品對應(yīng)的微孔編號，每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做雙孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。

    2、在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50l各標(biāo)準(zhǔn)品溶液，酶標(biāo)儀在各樣品孔中加入50l樣品溶液。

    3、在所有孔中加入50l的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。

    4、小心揭開蓋板膜，甩干孔中液體，用稀釋好的洗滌液（250μl/孔）充分洗滌微孔板3次，在吸水紙上拍干（拍干后未清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

    5、酶標(biāo)儀在所有孔中加入100l的酶標(biāo)二抗，酶標(biāo)儀用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。取出酶標(biāo)板，按步驟4洗板5次。

    6、洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l底物液A，再加50l底物液B，輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻，25℃環(huán)境避光顯色15分鐘(在顏色淺的情況下可適當(dāng)延長反應(yīng)時間，但總顯色時間不要超過30分鐘)。

    7、每孔中加入50l終止液，輕輕晃動使之徹底混勻，在450nm（建議使用雙波長450/630nm）下檢測吸光度，結(jié)果在5分鐘內(nèi)讀取。